南昌大学罗达亚教授

❶ 口腔拭子DNA提取步骤包括哪些

盐析法快速提取口腔拭子DNA

朱伟锋 罗达亚 涂硕 张霞丽 揭克敏 万福生

【摘要】：目的建立盐析法快速从口腔拭子
中提取基因组DNA的方法。方法首先以细胞裂解液和蛋白酶K消化口腔上皮细胞,然后用5 mol/L
NaCl沉淀蛋白质,用异丙醇沉淀DNA,最后用70%乙醇洗涤得到的DNA并将其溶于TE(10mmol/L Tris-HCl,1 mmol/L
EDTA,pH
8.0)中。用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对TP53基因的rs1042522和CHRNA3基因的
rs12910984位点进行分型。对不同基因型的样本测序验证。结果单支口腔拭子提取得到的DNA量在0.68～2.56μg之间,D260/D280
比值在1.77～1.94之间。经PCR扩增和酶切消化,10个样本的两个单核苷酸多态性都得到了清楚分型。酶切结果与测序结果吻合。结论本实验所建立的
盐析法可以快速、简便、经济地从口腔拭子得到高质量的基因组DNA。

【作者单位】：
南昌大学医学院生物化学与分子生物学教研室;